在反相高效液相色谱中,选择正确的缓冲液PH值,对可离解的化合物分析的重现性十分重要,不恰当的PH值可能导致不对称峰,宽峰,分裂峰或肩峰。

什么时候需要缓冲溶液呢?

在反相液相分析色谱中,流动相的PH值一般在2.5-7之间,当分析物在反相条件下可离解,或当样品的PH值在2.5-7之外时,就需要缓冲液。在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基,选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在。离子形式或中性化合物的形式,如果样品的PH值对柱子有伤害,则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。

如何选择缓冲液的PH值呢?

在选择缓冲液的PH值之前,应先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka两个PH值单位的,有助于获得好的,尖锐的峰。

如何应用缓冲液的PH值来调节方法的选择性呢?

氨基酸化合物的保留随PH的减小而降低,这个特性可以调节方法的选择性,如果两个化合物共流出,一个有氨基,适当改变PH值就可以分离这一物质对。由于可离解化合物的选择性可依靠PH值,所以变化的PH值也可以用来鉴别未知化合物的官能团,如果PH值变小,出峰变快,则化合物中可能存在氨基,当PH值变大,化合物出峰很快,或流出在死时间处,化合物可能是一种羧酸,因为羧基离子化后流出大大快于比质子化的中性化合物。

    正确的选择缓冲液在反相液相色谱方法中对于优化尖峰,获得稳定的保留时间都十分重要。

 

 

 

长春百益制药有限责任公司

原料生产部   陈琦  

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